Joga com Ezio, o Assassino mais emblemático da série, e segue a sua viagem que começa com um jovem que aprende a ser Assassino na Itália renascentista do século XV, passando de seguida para Roma onde assume a liderança de toda a Irmandante dos Assassinos. Finalmente, embarca na aventura final de Ezio em Constantinopla no século XVI enquanto ele segue os passos do seu grande mentor, Altaïr, numa viagem de descoberta e revelação.